色谱柱是高效液相色谱的心脏,在高效液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质,造成流体阻力加大所致。浅析其原因,大致有以下几方面:VZM检测VBA
流动相的前处理VZM检测VBA
杂质堵塞色谱柱进口滤片,导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤,或虽已过滤但过滤不彻底,使固体杂质滞留于滤板上所造成的。VZM检测VBA
样品的沉淀VZM检测VBA
当溶解样品的溶剂与流动相不一致时,样品进入色谱柱,有时可能因溶解度降低而沉淀出来,造成压力升高。VZM检测VBA
晶体的析出VZM检测VBA
使用含有缓冲液的流动相时,缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中,它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出,造成流体阻力加大、压力升高。VZM检测VBA
细菌或霉菌孳生VZM检测VBA
霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板,导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。VZM检测VBA
溶质吸附VZM检测VBA
当溶质在柱子上有较强的吸附,且所用的流动相难以将它们洗脱时,累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。VZM检测VBA
流动相更换过度较快VZM检测VBA
当改变流动相体系时,不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中,也会造成压力升高。VZM检测VBA
压力脉冲VZM检测VBA
运行过程中,有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化,填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大,造成压力升高。VZM检测VBA
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色谱柱色谱柱压升高的原因_色谱柱
选择色谱柱规格时应考虑哪些因素?
色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析,只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子,因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。VZM检测VBA
在选择色谱柱规格时应考虑下列因素:VZM检测VBA
①色谱柱内径:样品的上样要与色谱柱的交叉截面面积相对称,要选择色谱柱的内径要适合于样品的上样量。VZM检测VBA
②填料的粒径:越小的粒径具有越高的柱效,但是价格更高,并且带来更高的柱压,要求设备的硬件具备更高的压力耐受性。在被测组分的色谱峰与其它色谱峰非常靠近时,就需要更高的柱效,此时较小粒径的色谱填料就显得非常有用。相反,越大的粒径则柱效越低,但价格也相对较低,同时对设备的要求也不高。VZM检测VBA
③色谱柱长度:越长的色谱柱具有越高的柱效和更高的样品承载量,但是柱压将会更高,同时分离时间可能会更长。VZM检测VBA
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