高效液相色谱仪适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中针对这种精密而又运用广泛的科学仪器。4O6检测VBA
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下面我们来聊一聊基线。HPLC常见的基线问题主要有基线漂移以及基线噪音。4O6检测VBA
基线漂移4O6检测VBA
线漂移基线漂移是色谱工作者普遍遇到的问题。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要30min的平衡时间，如果用了缓冲溶液、缓冲盐，或者在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，仍然发现基线漂移，原因可能有以下几种：4O6检测VBA
1、柱温波动4O6检测VBA
控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。4O6检测VBA
2、流通池被污染或有气体4O6检测VBA
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(尽量断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。4O6检测VBA
3、紫外灯能量不足4O6检测VBA
更换新的紫外灯4O6检测VBA
4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。4O6检测VBA
基线噪音4O6检测VBA
对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。4O6检测VBA
基线噪音(规则的)4O6检测VBA
产生基线噪音的原因有：在流动相、检测器或泵中有空气;漏液;流动相混合不完全;温度影响(柱温过高,检测器未加热);在同一条线上有其他电子设备;泵振动。4O6检测VBA
了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气;冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;检查管路接头是否松动;泵是否漏液;是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封;用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器;有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。4O6检测VBA
基线噪音(不规则的)4O6检测VBA
(1)漏液：检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。4O6检测VBA
(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流动相的组成。4O6检测VBA
(3)流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。4O6检测VBA
(4)检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。4O6检测VBA
(5)系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统;检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。4O6检测VBA
(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池;4O6检测VBA
(7)检测器灯能量时不足更换灯;4O6检测VBA
(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。4O6检测VBA
(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。4O6检测VBA
高效液相色谱仪操作步骤如下：4O6检测VBA
1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.4O6检测VBA
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。4O6检测VBA
3)打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4O6检测VBA
4)进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。4O6检测VBA
5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。4O6检测VBA
6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。4O6检测VBA
7)设计走样方法。4O6检测VBA
8)进样和进样后操作。4O6检测VBA
9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。4O6检测VBA
10)填写登记本，由负责人签字。4O6检测VBA
11)流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。4O6检测VBA
12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。4O6检测VBA
13)所有过柱子的液体均需严格的过滤。4O6检测VBA
14)压力不能太大，可以不要超过2000psi。4O6检测VBA
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。4O6检测VBA
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标签: 液相色谱仪
液相色谱仪液相色谱仪的操作与基线问题处理_液相色谱仪
液相色谱仪自动进样器故障排除方法
自动进样器的故障容易被发现，有时液相色谱仪系统出了故障而不能确定是否是进样器故障，可以用手动进样几次，或用一台好的自动进样器代替，如排除了故障，说明自动进样器有了问题。不同厂商的自动进样器差异很大，除一些共性故障外，较好查阅操作手册或与供应商联系。4O6检测VBA
除自动进样器机械、控制系统可能出现故障外，在操作及方法学方面也可能出现相应的问题，这里主要根据自动进样器的设计特点，对试验过程中可能出现的问题进行说明。4O6检测VBA
一、滞后体积4O6检测VBA
高效液相色谱仪中滞后体积是指流动相混合器到柱头的体积，包括溶剂混合器和混合器到柱头之间连接管的体积，对于低压混合系统，也包括泵体积。滞后体积较大可能导致实验的重复性差、方法移植困难。通常的HPLC系统中，滞后体积一般在0.2mL～5mL之间，主要取决于装置的设计。4O6检测VBA
滞后体积中较重要的部分为自动进样器的定量环体积。只有定量环体积小于100μL时，其对滞后体积的影响才可以近似不计。当定量环体积较大时，这种影响将表现出来。例如，采用50μL的定量环时滞后体积为300μL，如果改用1mL定量环，滞后体积将变成1250μL，这种变化直接影响到色谱分离结果。在实际分离过程中，采用的色谱柱较细时，必须考虑滞后体积的影响，解决的办法为更换较小的定量环，减小滞后体积。4O6检测VBA
二、样品瓶过满4O6检测VBA
如果样品瓶过满，在瓶盖较紧、进样量较大的情况下，可能会导致进样重复性变差。其原因为样品瓶中的样品被抽出时，盖紧的瓶盖不能使空气及时进入，造成部分真空。由于这种真空作用，注射器不能够吸取足够量的样品体积。在极端的情况下，对于挥发性稀溶液样品，针内甚至会出现气泡，影响分析工作的正常进行。4O6检测VBA
有些自动进样器采用加排空针的方法克服这一问题，但这种方法并不常用。较简单的解决办法为不要使样品瓶过满。一般装样量在样品瓶的1／2到3／4之间较为适宜。4O6检测VBA
三、进针深度的调节4O6检测VBA
样品量足够多时，不必考虑这一问题。但对于痕量分析而言，进针深度的调节问题将较为突出。理想的情况下可以使进针深入到接近样品瓶底部，这样可以较大限度地利用样品。当可用的样品体积有限时，可以采用微量样品瓶以增加给定体积样品的相对深度。如果进针过深，可能插入样品瓶的底部，甚至导致针尖阻塞。如果进针深度不足，样品只及针尖部分，针将不能抽取足够量的样品，部分空气取而代之。4O6检测VBA
对于进针深度的调节，一般采用机械或电动的方法，目前大部分厂商可以在液相色谱仪色谱工作站上设置。无论采用哪种方法，实验之前都必须认真调节，更换样品瓶类型时还需要重新调整。4O6检测VBA
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液相色谱仪液相色谱仪自动进样器故障排除方法_液相色谱仪
