紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry)，又称紫外吸收光谱法( Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry)，它是研究分子吸收190.0~1100.0nm波长范围内的吸收光谱。紫外吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是研究物质电子光谱的分析方法。通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量测定。AaM检测VBA
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苯酚是一种剧毒物质，可以致癌，已经被列入有机污染物的黑名单。但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。苯酚在紫外光区的最大吸收波长λmax=270nm。对苯酚溶液进行扫描时，在270nm处有较强的吸收峰。AaM检测VBA
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定性分析时，可在相同的条件下，对标准样品和未知样品进行波长扫描，通过比较未知样品和标准样品的光谱图对未知样进行鉴定。在没有标准样品的情况下，可根据标准谱图或有关的电子光谱数据表进行比较。AaM检测VBA
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定量分析是在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并自动绘制标准曲线。再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。AaM检测VBA
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仪器与试剂AaM检测VBA
1．紫外可见分光光度计AaM检测VBA
2．容量瓶（1000ml、250ml）AaM检测VBA
3．比色管（50ml）AaM检测VBA
4．吸量管（5ml、10ml）AaM检测VBA
5．苯酚（AR）AaM检测VBA
准确称取苯酚1.000g于200ml蒸馏水中，溶解后定量转移到1000ml的容量瓶中，作为储备液。AaM检测VBA
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紫外可见分光光度法测定苯酚含量实验步骤AaM检测VBA
1．打开仪器及计算机、显示器、打印机电源，进入软件操作系统，待仪器自检结束，点击OK，进入操作主页面。AaM检测VBA
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2．波长扫描AaM检测VBA
(1)确定波长扫描参数：AaM检测VBA
光谱带宽2.0nmAaM检测VBA
光度测量形式 吸光值AaM检测VBA
扫描范围 200～500nmAaM检测VBA
扫描速度 1000nm/minAaM检测VBA
数据间隔点 1nmAaM检测VBA
存储文件 选择路径和文件名AaM检测VBA
(2)做基线AaM检测VBA
将盛有参比液的比色皿分别放入参比光路和样品光路，开始进行基线扫描AaM检测VBA
(3)波长扫描AaM检测VBA
将盛有样品和参比液的比色皿分别放入参比光路和样品光路，点击开始扫描AaM检测VBA
(4)定性分析AaM检测VBA
将试样的波长扫描图与已知样的在相同条件下的波长扫描图或已知的谱图相比较，对试样进行定性分析AaM检测VBA
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3．定量分析AaM检测VBA
(1) 标准系列的配制AaM检测VBA
于5支50ml的比色管中，用吸量管分别加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。AaM检测VBA
(2) 确定定量分析参数AaM检测VBA
设置a：方法 对每个标准品的重复读取次数 1AaM检测VBA
对每个样品的重复读取次数 1AaM检测VBA
是否需要测量标准样品 需要AaM检测VBA
校正曲线 线性AaM检测VBA
计算方式 用峰高计算定量的数值AaM检测VBA
b：样品 总共测量样品的个数 6AaM检测VBA
输入待测样品的名称 苯酚AaM检测VBA
样品标签从第几号开始编辑 1AaM检测VBA
输入标准样品浓度值AaM检测VBA
在std栏中对标准样品进行标识AaM检测VBA
c：质量控制 需要质量控制AaM检测VBA
对有问题的测量结果标记后继续测量AaM检测VBA
输入允许的最大浓度AaM检测VBA
输入允许的最低浓度AaM检测VBA
d：仪器 狭缝 2.0nmAaM检测VBA
测定形式 吸光值AaM检测VBA
强度倍数 1AaM检测VBA
工作波长 270nmAaM检测VBA
积分时间 5sAaM检测VBA
把空白液注入两个比色皿内，并分别放入参比和样品光路，按“zero”进行调零，然后按“OK”AaM检测VBA
e：报告 需要报告 要在线报告AaM检测VBA
f：结果储存 输入选择的路径与文件名AaM检测VBA
(3)开始定量测量，按照提示放入各样品AaM检测VBA
(4)观察标准、样品及校正曲线AaM检测VBA
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紫外可见分光光度计紫外可见分光光度法测定苯酚含量的实验步骤_紫外可见分光光度计
紫外可见分光光度计原理及应用
紫外可见分光光度计法从问世以来，在应用方面有了很大的发展，尤其是在相关学科发展的基础上，促使分光光度计仪器的不断创新，功能更加齐全，使得光度法的应用更拓宽了范围。AaM检测VBA
1.原理AaM检测VBA
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量， 相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其 特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或 测 定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸 收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。AaM检测VBA
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。AaM检测VBA
2.应用AaM检测VBA
2.1 检定物质AaM检测VBA
根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。AaM检测VBA
2.2 与标准物及标准图谱对照AaM检测VBA
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标 准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。AaM检测VBA
2.3 比较最大吸收波长吸收系数的一致性AaM检测VBA
2.4 纯度检验AaM检测VBA
2.5 推测化合物的分子结构AaM检测VBA
2.6 氢键强度的测定AaM检测VBA
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不 同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂 。AaM检测VBA
2.7 络合物组成及稳定常数的测定AaM检测VBA
2.8 反应动力学研究AaM检测VBA
2.9 在有机分析中的应用AaM检测VBA
有机分析是一门研究有机化合物的分离、鉴别及组成结构测定的科学，它是在有机化学和分析化学的基础上发展起来的综合性学科。AaM检测VBA
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