紫外分析仪是荧光技术的应用,荧光技术是什么呢 首先了解一下什么是荧光,荧光又作"萤光",是指一种光致发光的冷发光现象。QGt检测VBA
当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);而且一旦停止入射光,发光现象也随之立即消失。QGt检测VBA
具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 知道了什么是荧光,顾名思义就能想到什么是荧光技术。荧光技术是某些物质受一定波长的光激发后,在极短时间内(10-8秒)会发射出波长大于激发波长的光,这种光称为荧光。QGt检测VBA
这一发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光技术(fluorescent technique)。QGt检测VBA
物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况,第一种是自发荧光,如叶绿素、血红素等经紫外线照射后,能发出红色的荧光,称为自发荧光;第二种是诱发荧光,即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光,称为诱发荧光。QGt检测VBA
荧光技术在生物化学及分子生物学研究中应用主要包括以下几个方面:QGt检测VBA
1、物质的定性:不同的荧光物质有不同的激发光谱和发射光谱,因此可用荧光进行物质的鉴别。与吸收光谱法相比,荧光法具有更高的选择性。QGt检测VBA
2、定量测定:利用在较低浓度下荧光强度与样品浓度成正比这一关系可以定量分析样品中荧光组分的含量,常用于测定氨基酸、蛋白质、核酸的含量。QGt检测VBA
荧光定量测定的一个优点是灵敏度高,例如维生素B2的测定限量可达1毫微克/毫升,这一优点使测定时所需要样品量大大减少。QGt检测VBA
这种定量测定方法还可应用于酶催化的反应,只要反应前后有荧光强度的变化,就可用来测定酶的含量及酶反应的速率等。QGt检测VBA
3、研究生物大分子的物理化学特性及其分子的结构和构象:荧光的激发光谱、发射光谱、量子产率和荧光寿命等参数不仅和分子内荧光发色基团的本身结构有关,而且还强烈地依赖于发色团周围的环境,即对周围环境十分敏感。QGt检测VBA
利用此特点可通过测定上述有关荧光参数的变化来研究荧光发色团所在部位的微环境的特征及其变化。QGt检测VBA
在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的荧光发色团(如色氨酸、酪氨酸、鸟苷酸等,此类荧光称为内源荧光)以外,可将一些特殊的荧光染料分子共价地结合或吸附在生物大分子的某一部位,通过测定该染料分子的荧光特性变化来研究生物大分子,这种染料分子被称为"荧光探针",它们发出的荧光一般称为外源荧光。QGt检测VBA
荧光探针的应用,大大地开拓了荧光技术在分子生物学中的应用范围。QGt检测VBA
4、利用荧光寿命、量子产率等参数可以研究生物大分子中的能量转移现象:通过该现象的研究,可以获得生物大分子内部的许多信息。QGt检测VBA
以往人们常用荧光偏振做指标来研究生物大分子动力学。人们趋于用荧光偏振随时间的衰减来研究这些问题。在这种方法中,激发光不是一连续的面偏振光,而是一偏振的光脉冲,因此测得的F∥和F是在两个不同方向上偏振的荧光随时间的衰减,它既和荧光寿命τ有关,又与分子在溶液中的运动有关,因此常表示为F∥(t)和F⊥(t)。由它们可得一相当重要的物理量--各向异性参数A(t)。QGt检测VBA
由A(t)可推测生物大分子的形状、分子转动弛豫时间(即从一个定向的状态到一个无定向状态所要的时间),进而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的转动角度和时间之间的函数关系。QGt检测VBA
由这些结果可以研究分子之间的相互作用、分子间结合的紧密程度、蛋白质、核酸分子的解聚程度等等。QGt检测VBA
另外,荧光技术在免疫学中亦有广泛的应用。较为重要的就是荧光抗体法。将某些荧光染料与血清抗体相结合,这种标记的抗体仍可专一地与相应抗原发生结合,形成的复合体具有荧光特性,从而可以确定抗原或抗体的存在及其含量。QGt检测VBA
利用荧光技术设计的紫外分析仪主要是物质的定性方面的应用,包括:QGt检测VBA
⑴在科学实验工作中检测,许多主要物质如蛋白质、核苷酸等。QGt检测VBA
⑵在药物生产和研究中,可用来检查激素生物碱,维生素等各种能;产生荧光药品质量,特别适宜作薄层分析和纸层分析斑点和检测。QGt检测VBA
⑶在染料涂料橡胶、石油等化学行业中,测定各种荧光材料,荧光指示剂及添加剂,鉴别不同种类的原油和橡胶制品。QGt检测VBA
⑷纺织化学纤维中可测定不同种类的原材料。如羊毛,真丝人造纤维,棉花,合成纤维,并可检查成品质量。QGt检测VBA
⑸在粮油,蔬菜,食品部门,可用于检查毒素(如黄曲霉素等),食品添加剂,变质的蔬菜、水果、可可豆、巧克力、脂肪、蜂蜜、糖蛋等的质量。QGt检测VBA
⑹在地质、考古等部门,可起到发现各种矿物质,判别文物化石的真伪。QGt检测VBA
⑺在部门可检查指纹、测定密写字迹等。QGt检测VBA
适用范围QGt检测VBA
在科学实验工作中它是检测许多主要物质如蛋白质、核苷酸等。QGt检测VBA
在药物生产和研究中,可用来检查激素生物碱,维生素等各种 能产生萤光药品的质量,它特别适宜作薄层分析,纸层分析斑点和 检测。QGt检测VBA
在染料涂料橡胶、石油等化学行业中,测定各种萤光材料,萤光指示剂及添加剂, 鉴别不同种类的原油和橡胶制品。QGt检测VBA
在纺织化学纤维中可以用于测定不同种类的原材料如羊毛、真丝人造纤维、棉花合成纤维,并可检查成品质量。QGt检测VBA
在粮油、蔬菜、食品部门可用于检查毒素、(如黄曲霉素等)食品添加剂,变质的蔬菜、水果、可可豆肪、巧克力、脂肪、蜂蜜、糖、蛋 00等的质量。QGt检测VBA
在地质、考古等部门可起到发现各种矿物质、判别文物化石的真伪。QGt检测VBA
在门可检查指痕测定、密写字迹等。QGt检测VBA
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紫外分析仪关于紫外分析仪的原理及其应用_紫外分析仪 氨基酸分析仪属专用液相色谱仪,其常见的流路故障无非是“堵”和“漏”两个方面,而更主要的是“堵”。要想有效的预防和根除流路堵塞的故障就必须牢记“病从口入,预防为主”这八个字。下面从三个方面来阐述。
QGt检测VBA QGt检测VBA 一、把住入口关,谨防病从口入QGt检测VBA QGt检测VBA 杂质进入氨基酸分析仪的渠道有三个,从进样器随样品进入,随缓冲液进入,随进样器洗涤液进入。根据这三种情况,采取相应的措施,关键是要牢牢把好“三关”。
QGt检测VBA QGt检测VBA 一是样品处理关。严格按照程序处理样品,特别对生理体液样品,更需小心谨慎,加沉淀剂一定要过量,离心所用时间宁长勿短,zui后,一定要用0.22μm超滤膜进行超滤后方可上机,以防树脂的污染和柱头的堵塞。
QGt检测VBA QGt检测VBA 二是缓冲液关。这个环节往往被忽略,因为,在配制试剂时,往往都用滤纸进行过滤,过滤后的试剂虽有用肉眼不能发现的异物,但实际上,液体中仍存在着许多微小的颗粒和污染物,这些小的微粒有着很强的附着力,如不清除将造成泵过滤器、管路、柱头及比色池的污染和堵塞。
QGt检测VBA QGt检测VBA 我们知道柱头中的过滤器是用金属烧结而成的,它具有很小的孔径(约0.2μm),如果溶液中有大于该直径的微粒存在,将会引起过滤的堵塞或部分堵塞,轻者导致泵压升高,重者使分析柱完全堵塞。为此,配制缓冲液的程序应当是这样的:首先,用360目的尼龙沙网过滤缓冲液(粗滤),然后,用全玻璃的溶液过滤器装上0.45μm的微孔滤膜进行超滤。配制茚三酮的缓冲液也应按上述程序进行。三是进样器洗涤液关。工作时,洗涤液要每日必换。为了防止灰尘、昆虫或其它杂质等异物的落入,制作一个有机玻璃面罩,罩在自动进样器上面(参考尺寸为:50cm×38cm×19cm),并在面罩前部下边20cm处留一小孔,以便引入吸样泵与吸样针之间的连线。
QGt检测VBA QGt检测VBA 二、氨基酸分析仪管路及部件的清洗QGt检测VBA QGt检测VBA 经常需要进行清洗的管路和部件是氨基酸分析仪吸样泵阀及泄液管的管路。由于吸样泵止逆阀和泄液管中常常存有氨基酸样品的残余物,在室温下,很容易滋生细菌和霉菌,有时,还会有密封环的碎屑,这些异物的存在,可造成管路流通不畅、泵阀关闭不紧,进而导致采样量不准,影响测定结果的准确性。甚至,还可能使管路完全堵塞。
QGt检测VBA QGt检测VBA 氨基酸分析仪吸样泵阀的清洗步骤:将吸样泵止逆阀取下,放入超声波清洗池中,加30度左右的温水和几滴洗洁精,超声清洗10~15分钟,如发现仍不干净,可将阀体拆开清洗,冲洗干净后,再组装上(注意安装方向)。吸样泵泄液管的清洗:在每次关机时,可将泄液管从阀上卸下,用玻璃注射器(50ml以上并选用适当型号的针头)先用去离子水注射清洗,再用75%乙醇注射清洗。如果管路中沉积物太多,不易清洗干净,或管路已完全堵塞,可将泄液管盘起放入超声波清洗池中,40度温水超声清洗10~15分钟,边清洗边用注射器反复推和抽,使管路里面的沉积物逐渐松动,zui后完全清除。必要时还可配合细铜丝等工具的使用,将沉积物捅开并清洗。在突然断电又不能在短时间内来电的情况下,为了防止反应盘管中发生堵塞,也可采用注射器注入去离水的方法清洗反应盘管。具体方法是:将混合器(三通)与反应盘管接合部卸下,选用适当型号的针头插入盘管一端,用注射器(50ml以上)注入去离水。如压力太大,可将反应盘管后部的倍压线圈拆下另行清洗。待反应液全部被去离子水置换出来后,再将管路接好。这里有两点需注意的是:1、针头必须水平插入,以防刺破反应盘管的管壁;2、凡是有塑料管连接的部位,螺帽都需适度旋紧,以防管壁变形,使阻力增大。
QGt检测VBA QGt检测VBA 三、氨基酸分析仪分析柱的保养QGt检测VBA QGt检测VBA 氨基酸分析仪的分析柱及去氨柱的保养分两个方面:
QGt检测VBA QGt检测VBA 1、样品及试剂的处理以防污染和堵塞,在前面已经提及;
QGt检测VBA QGt检测VBA 2、分析柱的再生。合理的再生能有效的清除树脂及过滤器中的残余物,以减少因树脂污染和过滤器堵塞而引起的噪声,使氨基酸分析仪能够经常在较低的压力下工作,降低泵的工作负载,延长分析柱的使用寿命。再生不好的柱子往往反映出压力偏高,噪声过大,图谱基线不良。那么,除了氨基酸分析仪分析程序设定的再生外,在什么时间再生?再生多长时为好呢?笔者多年的经验是:开机后30分钟,关机前30分钟。但是,这个时间不是的,根据氨基酸分析仪状况可适当缩短或延长。在其它情况正常时,zui明显的判定分析柱再生好坏的特征就是泵的工作压力,再生较好时,泵压波动较小且工作压力较低。再生的具体做法是:开机后运行吸样泵清洗程序(4-2-0),然后,运行分析柱再生程序(1-6-0;2-10-0)。在运行此程序时应注意的是,一定要事先将缓冲液泵的泄液阀打开,约5分钟后,再将其关闭。这样做可将缓冲管里的残留液置换出去,还可较快地使分析柱的压力降低。待试验结束关机前,再运行上述程序一次(约30分钟)。
QGt检测VBA QGt检测VBA 此外,还应切记:管路越频繁拆卸越容易泄漏。这是因为一旦有堵塞故障出现时,泵压必然要升高,这使得柱头过滤器中的杂质堵得更紧,泵压升高会使柱塞泵的密封环承受较大的负荷,更容易磨损,以至漏液。另外,由于经常拆卸管路的不锈钢接头处,使得锥型密封及密封环变形,而这种变形是不可逆的,当重新连接时,往往因结合不好而发生漏液。再有,由于在排除柱头堵塞和树脂污染的故障时,都需重新装柱,这就要造成一些树脂的损失,使得分析成本增大。所以,对氨基酸分析仪的保养一定要坚持预防为主,谨防病从口入。实践证明,只要平时严格按照上面介绍的有效措施对氨基酸分析仪进行保养,就可大大提高仪器的使用寿命,降低分析成本,提高工作效率。