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微量分光光度计的原理及应用如何 光度计工作原理

时间:2025-04-12 20:44:43  来源:  作者:

    微量分光光度计能够快速准确的定量检测核酸、蛋白质等溶液。具有使用方便、消耗样品少(仅2μl)、不用预热、能迅速清理残留样品、不需要比色皿或其它样品定位装置、样品不需要稀释等特点,常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量,目前已成为众多实验室的常规仪器。BSx检测VBA

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    工作原理BSx检测VBA

    超微量分光光度计进行浓度测定的原理是根据朗伯-比尔(Lamber-Beer)定律,A=K·C·L 式中,A为吸光度;K为吸(消)光系数;C为溶液的浓度;L为液层厚度。此公式说明:在入射光一定时,溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度成正比。此式就是光的吸收定律的数学表达式,又叫朗伯-比尔定律。BSx检测VBA

    核酸定量BSx检测VBA

    核酸的定量是超微量分光光度计使用频率最大的功能。可以定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA以及RNA含量。这是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键,具有紫外吸收的特性,最大的吸收波长在260nm,吸收波谷在230nm。BSx检测VBA

    除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。BSx检测VBA

    蛋白质直接定量BSx检测VBA

    这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求蛋白的浓度较高。BSx检测VBA

    比色法蛋白质定量BSx检测VBA

    蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。BSx检测VBA

    比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。BSx检测VBA

    与传统分光光度计相比,超微量分光光度计要求的样品体积小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可。除此之外,实验过程也更为简单,不需预热,可随时检测,检测结果显示吸光度值的同时,程序直接给出浓度值。超微量分光光度计与传统相比,体积更小,更方便使用。BSx检测VBA

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分析紫外可见光光度计的几种类型和特点

紫外可见分光光度计是一种光学仪器,型号很多,按其光学系统可分为单光束分光光度计,双光束分光光度计和双波长分光光度计三种类型。BSx检测VBA

    一、单光束分光光度计BSx检测VBA

光源触发,经过单色器分光得到一束平行单色光,从进入吸收池到最后照在检测器上,始终为一束光。下图为工作原理图,单光束分光仪器有四大特点:BSx检测VBA

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    1.价格较为便宜且产品操作简单BSx检测VBA

    2.任一波长的光均要用参比调T=100%后,再测量样品BSx检测VBA

    3.不能进行吸收光谱的自动扫描BSx检测VBA

    4.光源不稳定性影响测量准确度BSx检测VBA

二、双光束分光光度计(工作原理如下图)BSx检测VBA

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从光源中发出的光经单色器分光后被切光器分成两束强度相等的单色光,一束通过参比溶液,一束通过被测溶液。光度计能自动比较两束光的强度,此比值即为被测液的透射比,经对数交换将它转换为吸光度并作为波长的函数记录下来,主要有以下几个优点:BSx检测VBA

    1)不需要更换吸收池,而且测量方便BSx检测VBA

    2)补偿了光源不稳定性的影响BSx检测VBA

    3)实现了快速自动吸收光谱扫描BSx检测VBA

    4)不能消除试液的背景干扰BSx检测VBA

三、双波长分光光度计BSx检测VBA

同一光源发出的光被分成两束,跟别经过两个单色器,得到两束不同波长的单色光,利用切光器使两束光以一定频率胶体照射到同一吸收池,然后经过光电倍管和电子控制系统,最后由显示器显示出两个波长处的吸收光度差值,具体的原理请看下图。BSx检测VBA

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关于双波长分光光度计有哪些特点,请接着往下看:BSx检测VBA

    1)不需要参比溶液BSx检测VBA

    2)可以消除背景吸收干扰,包括待测溶液与参比溶液组成的不同及洗手液厚度差异的影响,提高了测量的准确度。BSx检测VBA

    3)适合多组分混合物,浑浊试样的定量分*析,看进行导数光谱分析BSx检测VBA

    4)价格比较贵BSx检测VBA

紫外可见光光度计的除了以类别,还有很多的型号,不同的产品测量是不一样的,在选择产品的时候,还是要多参考一下资料,或者跟厂家进行详细的咨询。BSx检测VBA

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紫外可见分光光度计分析紫外可见光光度计的几种类型和特点_紫外可见分光光度计

原子吸收分光光度计故障排查方法

  原子吸收光谱仪是试验中常见的仪器,因此实验室人员应该好好的去维护它,以免发生不必要的故障,造成实验结果的不准确BSx检测VBA

  故障排除首先应分析原因。仪器故障产生的原因和出现的现象是错综复杂的。必须小心观察故障现象,认真检测和细致的分析比较,才能找到故障的所在。下面介绍几种常见故障的排除方法BSx检测VBA

  1、光源系统故障BSx检测VBA

  A、空心阴极灯点不亮故障原因:灯电源出问题或未接通;灯头与灯座接触不良;灯头接线断路;灯漏气。BSx检测VBA

  查处方法:分别检查电源、连线和插接件;若不是电路问题,再进行换灯检查。BSx检测VBA

  B、灯阴极辉光颜色异常故障原因:灯内惰性气体不纯。BSx检测VBA

  查处方法:在工作电流或大电流(80Ma,150mA)下反向通电处理。BSx检测VBA

  C、灯阴极口外发光或阴极内发生跳动的火花状放电故障原因:灯内惰性气体压力降低不能维持正常放电,后者由阴极表面氧化物或杂质所致。BSx检测VBA

  查处方法:前中情况需换新灯;后种情况通过十几毫安的电流直到火花放电停止,若无效则换新灯。BSx检测VBA

  2、能量输出方面的故障BSx检测VBA

  A、空心阴极灯亮而高压开启后无能量输出故障原因:无负高压;空心阴极灯发光异常或位置不对;波长不准;燃烧器挡光;单色器故障;主机电路故障。BSx检测VBA

  查处方法:第二、三、四种情况易查,第一、五、六种情况需按说明书或维修手册的规定逐一处理或联系厂家。BSx检测VBA

  B、输出能量过低故障原因:灯能量弱;光路调整不佳;透镜或单色器内光学元件被污染;波长不准;放大电路增益下降;光电倍增管衰老。BSx检测VBA

  查处方法:如果是全波段内能量普遍偏低,应检测光电倍增管是否衰老和负高压是否正常;如果能量低与波长有关,除查看光学元件有无污染外,还应检查单色器光学系统有无机械位置变化;如果是因波长示值错乱,应重新校正波长;如果是线路增益问题,需检查放大板和光电倍增管查处原因。或直接联系厂家。BSx检测VBA

  C、工作时能量显示不变化故障原因:主机电路中前置放大器连接问题;主放大器异常。BSx检测VBA

  查处方法:检查前置放大器和运算放大器。BSx检测VBA

  D、挡光时能量不为零故障原因:前置放大器组件或主放大器组件失调或损坏。BSx检测VBA

  查处方法:用万用表监测前置放大器输出,或更换主放大器上的运算放大器。BSx检测VBA

  3、吸收信号方面的故障BSx检测VBA

  A、零点不对故障原因:空心阴极灯衰老,强度太弱;波长调节不准;石英窗口和聚光镜表面污染。BSx检测VBA

  查处方法:针对具体原因相应处理BSx检测VBA

  B、静态基线漂移故障原因:光源系统和检测系统故障。BSx检测VBA

  查处方法:首先查明仪器是否受潮,放置吸潮硅胶仪器通电去潮,一段时间后仪器稳定性会逐渐正常。查明仪器单独“地线”是否良好。任何电磁感应都会使仪器产生漂移。元素灯和灯电源的稳定性负高压电源的稳定性等都可能导致基线漂移。BSx检测VBA

  C、点火基线漂移故障原因:静态基线漂移;原子化系统故障。BSx检测VBA

  查处方法:排除静态基线漂移;检查吸液毛细管有无堵塞和气泡,废液排泄是否畅通和雾化室内有无积水。气源压力不稳和燃烧器预热不够均会引起漂移。当然波长不准也会导致漂移。针对具体情况分别加以处理。BSx检测VBA

  D、噪声大、读数不稳故障原因:光源系统、原子化系统、分光系统和检测系统发生故障。BSx检测VBA

  查处方法:首先区分故障是来源于原子化系统还是电检测系统。通过点燃火焰吸喷纯水和不点火的情况比较,据基线稳定度就和判断。BSx检测VBA

  如果判断故障来源于原子化系统,还要进而判断是来自火焰还是喷雾装罩,可通过吸喷纯水和调节喷雾器伟观察噪声电平是否明显减小或消失判断,否则噪声可能主要来自火焰。可调整燃助比、燃烧器高度和稳定气源压力来观察噪声电平的变化情况。喷雾器是火焰原子化系统噪声的主要来源。BSx检测VBA

  如果判断故障主要来自电检测系统,需先区分出来自灯电源还是检测系统。可使用合格的铜灯让仪器和灯充分预热,切断入射光,考察此时的噪声电平。若正常则故障来自灯电源或元素灯。再进一步检测灯电源或更换新灯检查。BSx检测VBA

  如果否定来自灯或灯电源,则需进一步检查单色器系统和检测系统。故障现象随波长而变化,则可判断故障主要来自单色器系统。单色器内部的杂散光、光栅及其他光学元件表面积聚灰尘、污秽均能使噪声电平增大。检测系统是噪声主要来源之一。需用万用表和示波器先查清是来自电源供电还是光电倍增管或电路。读数不稳定表示吸收信号上叠加较大的噪声。这对测量是不利的。导致读数不稳定的原因主要来自原子化系统,吸液毛细管堵塞,雾化器雾口腐蚀,雾化室内积液,空气和乙炔不纯或压力不稳,试液基体浓度过大,有沉淀和夹杂物,燃烧器缝口沉积有碳和无机盐或缝口堵塞而使火焰呈锯齿形,所有这些情况均影响读数稳定性。应针对具体问题加以检查排除。BSx检测VBA

  4、灵敏度和检出限方面的故障BSx检测VBA

  A、灵敏度低的故障原因:仪器工作条件不是较佳;毛细管和节流嘴相对位置和同心度不佳;撞击球位置不佳;雾化室内积废液;元素灯质劣;线路增益下降;光学元件积灰尘。BSx检测VBA

  查处方法:需逐一根据不同问题查处处理。BSx检测VBA

  B、检出限偏离故障原因:导致灵敏度低的诸项故障;造成噪声过大和读数不稳的各项故障。BSx检测VBA

  查处方法:根据上述有关方法查处故障。BSx检测VBA

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原子吸收分光光度计原子吸收分光光度计故障排查方法_原子吸收分光光度计

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