分光光度法是指应用分光光度计的分析方法，具有灵敏、准确、快速及选择性好等特点。KE4检测VBA
通常所测样品溶液浓度下限可达10-6~10-5mol/L，适用于测定食品中的微量组分（如肉制品中的亚硫酸盐、糖果中的二氧化硫等）。KE4检测VBA
原理KE4检测VBA
物质对光的选择性吸收KE4检测VBA
当光束照射到物质上时，光与物质发生相互作用，产生反射、散射、吸收或透射。KE4检测VBA
若被照射的是均匀溶液，光的散射可以忽略。KE4检测VBA
溶液颜色的产生KE4检测VBA
当一束白光通过某一有色溶液时，一些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光则透过溶液。KE4检测VBA
透射光或反射光刺激人眼使人感到颜色的存在。KE4检测VBA
人把自身能感觉到的光定义为可见光。KE4检测VBA
在可见光区，不同波长的光呈现不同的颜色，因此溶液的颜色由透射光的波长所决定。KE4检测VBA
透射光与吸收光可组成白光，故称这两种光互为补色光，两种颜色互为补色。KE4检测VBA
光吸收的本质KE4检测VBA
当一束光照射到某物质或其溶液时，组成该物质的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”;KE4检测VBA
光子的能量就转移到分子、原子或离子上，是这些粒子由最低能态（基态）跃迁到较高能太（激发态），这个作用称为物质对光的吸收。KE4检测VBA
被激发的粒子约在10-8s后回到基态，并以热或荧光等形式释放出能量。KE4检测VBA
分子、原子或离子具有不连续的量子化能级，仅当照射光光子的能量hυ，与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差相当时，才能发生吸收。KE4检测VBA
不同物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，其基态和激发态能量差也不相同。KE4检测VBA
所以物质对光的吸收具有选择性。KE4检测VBA
吸收曲线KE4检测VBA
吸收曲线，也称为吸收光谱，描述了物质对不同波长的光的吸收能力。KE4检测VBA
将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度（即吸光度）；KE4检测VBA
然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，绘制的曲线即为吸收曲线。KE4检测VBA
不同浓度的同一物质，在吸收峰附近的吸光度随着浓度增加而增大，但最大吸收波长不变。KE4检测VBA
若在最大吸收波长处测定吸光度，则灵敏度较高。KE4检测VBA
因此，吸收曲线是分光光度法中选择测定波长的重要依据。KE4检测VBA
光吸收基本定律KE4检测VBA
即朗伯-比尔定律：KE4检测VBA
当一束平行单色光通过液层厚度为b的有色溶液时，溶质吸收了光能，光的强度就要减弱。KE4检测VBA
溶液的浓度越大，通过的液层厚度越大，入射光越强，则光被吸收的越多，光强度的减弱也越显著。KE4检测VBA
该定律是紫外可见分光光度法等各类吸光光度法定量分析的依据，是由实验观察得到的，不仅适用于溶液，也适用于其他均匀非散射的吸光物质。KE4检测VBA
A=lg(I/I0)=εbcKE4检测VBA
A-吸光度；KE4检测VBA
I0-入射光强度，cd；KE4检测VBA
I-透射光强度，cd；KE4检测VBA
ε-吸光系数，L/(mol˙cm)；KE4检测VBA
b-液层厚度（光程长度），cm；KE4检测VBA
c-有色溶液的浓度，mol/L。KE4检测VBA
其物理意义为：KE4检测VBA
当一束平行单色光通过单一均匀、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度的乘积成正比。KE4检测VBA
式中ε是吸光物质在特定波长和溶剂的情况下的一个特征常数，数值上等于浓度为1mol/L的吸光物质在1cm光程中的吸光度。KE4检测VBA
ε是吸光物质吸光能力的量度，ε值越大，方法的灵敏度越高。KE4检测VBA
由实验结果计算ε时，常以被测物质的总浓度代替吸光物质的浓度，实际上时表观摩尔吸光系数。KE4检测VBA
在多组分体系中，如果各种吸光物质之间没有相互作用，体系的总吸光度等于各组分吸光度之和，即吸光度具有加和性。KE4检测VBA
透光度T是透射光强度I与入射光强度I0之比，即：KE4检测VBA
T=I/I0KE4检测VBA
因此：A=lg(1/T)KE4检测VBA
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分光光度计分光光度计的原理是怎样的呢？_分光光度计
分光光度计的维护使用
在使用分光光度计时，我们必须要注意一些使用后的维护，保养，和一些基本使用注意事项，才能达到更好的使用效果。KE4检测VBA
分光光度计的使用维护：KE4检测VBA
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。KE4检测VBA
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。KE4检测VBA
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。KE4检测VBA
4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。KE4检测VBA
5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。KE4检测VBA
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。KE4检测VBA
7、单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换单色器盒干燥剂。KE4检测VBA
8、光电转换元件不能长时间曝光,应避免强光照射或受潮积尘。KE4检测VBA
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分光光度计分光光度计的维护使用_分光光度计
三类分光光度计的特点详解
由于分光光度计是一种常用的实验室分析仪器，款式和价格都是多样化的，因此如何选择一款合适的分光光度计就显得尤为重要了。尽管分光光度计种类繁多，但不外乎：简易型、中档型和高档型三大类。KE4检测VBA
一、简易型仪器及其特点：KE4检测VBA
结构：这种类型的仪器多为单光束型，即只有一束光照射到样品室内；光源一般仅有钨灯；样品支架一般为推拉式四联池架；波长选择多为手动查找，重复性差；狭缝为一个固定宽度模式；光学性能指标较低；检测器多为光敏二极管；显示器多为机械表头或数码管显示器，数据处理器一般没有。此类仪器生产以国内厂家居多。KE4检测VBA
测量模式：多为定点（固定波长）吸光度或透过率测量方式，基本不能进行波长扫描测量。KE4检测VBA
适应范围：小型实验室及示范教学，分析样品相对简单，测试结果精度要求不高。KE4检测VBA
二、中档型仪器及其特点：KE4检测VBA
结构：此类仪器多为双光束型或准双光束型，但也有单光束仪器型；光源有钨灯和氘灯；样品池支架为两个固定式，分别是样品通道和参比通道；波长按照设定模式自动查找或扫描；狭缝多数仍为2nm固定宽度模式，也有1.5nm狭缝宽度的；检测器多数是硅光二极管，但也有少数用光电倍增管的；光学性能相对较高，其中光栅的技术指标尤为重要，较好的光栅为凹面型，为此无论在分辨率还是在杂散光方面指标要优于简易型仪器；显示器为液晶式或连接电脑，数据处理可由仪器自身具有的或外接计算机处理。并有一定的测量附件。KE4检测VBA
测量模式：透过率、吸光度、浓度直读、单光束；单点及扫描均可。KE4检测VBA
适应范围：此类仪器基本可满足大多实验室分析需要。KE4检测VBA
三、高档型仪器及特点：KE4检测VBA
除了中档仪器的特点外，主要是光学系统的设计和制造工艺水平更高了，比如使用了大尺寸的凹面光栅，并且光栅刻槽数大于1800条/mm；波长检测范围有的仪器在近红外区已经超过1100nm，可达到2600nm；狭缝均为连续可调型，以适应高分辨率的需要，波长扫描速度的档位也增加了，检测器均使用高灵敏度的光电倍增管和红外检测器；数据处理目前基本是电脑来执行；衡量一台仪器的另外一个指标是看此仪器是否具有丰富的附属测量器件，如偏振附件、积分球附件、反射附件、自动进样器附件、色度分析软件、薄膜附件等等。KE4检测VBA
测量模式：透过率、吸光度、浓度直读、反射方式、能量方式，单点、扫描均可；KE4检测VBA
适应范围：科研、光学产品的检测、生化样品检测、复杂样品检测等。不但可以测液态样品，也可测固态样品。KE4检测VBA
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分光光度计三类分光光度计的特点详解_分光光度计
