色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。bIU检测VBA
1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。bIU检测VBA
2.选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。bIU检测VBA
3.应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。bIU检测VBA
4.一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。bIU检测VBA
5.避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。bIU检测VBA
6.经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。bIU检测VBA
7.色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。bIU检测VBA
8.保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。bIU检测VBA
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色谱柱色谱柱的正确使用和维护_色谱柱
新色谱柱开启和安装的推荐步骤：bIU检测VBA
1. 开启色谱柱的包装盒，查看色谱的测试报告；bIU检测VBA
2. 根据色谱柱身上箭头标明的流向先将色谱柱入口端连入系统，柱出口端先不要连接；bIU检测VBA
3. 0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2 min内将流速升至0.5 mL/min;bIU检测VBA
4. 当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上；bIU检测VBA
5. 重启流速，然后在0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱30 min，在10 min内将流速升至1.0 mL/min冲洗30 min。bIU检测VBA
6. 参考柱效测试报告中的方法，30 min内将流动相梯度转换到柱效测试的流动相条件，然后使用5-10倍柱体积的流动相平衡色谱柱，直至压力与基线稳定。bIU检测VBA
7. 测试柱效。如果柱效与出厂报告偏移过大，或峰形拖尾就需要进行故障排查或联系上海易创分析仪器有限公司。bIU检测VBA
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反相色谱柱的清洗与再生：bIU检测VBA
1. 发现柱压升高，色谱峰出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔，或分离度降低，有可能是样品溶解度、色谱柱温度、碱性化合物干扰，也很有可能是色谱柱受污染，可以采取以下措施：bIU检测VBA
2. 如系统有连接在线过滤器或保护柱，首先排查在线过滤器与保护柱，可能需要更新。bIU检测VBA
3. 使用纯有机相低流速冲洗过夜。（如有使用缓冲盐，应使用不含缓冲液的流动相冲洗1h，然后再梯度过渡到纯有机相低流速冲洗过夜。）bIU检测VBA
4. 如有机相清洗不能解决问题，可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品的性质以及你了解的污染物性质选择清洗方法，用20-30倍柱体积（4.6*250 mm分析色谱柱大约80-120 mL溶剂清洗，流动相温度升至30-50 oC，然后再重复步骤3的方法。bIU检测VBA
5. 氨基柱bIU检测VBA
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反相色谱柱的保存：bIU检测VBA
1. 反相色谱柱应保存于纯有机相中（如乙腈或甲醇）。色谱柱使用于高温或极端pH条件下，或停用超过48小时，应当进行简单的清洗过程；bIU检测VBA
2. 清洗首先用不含缓冲盐的流动相冲洗20-30倍柱体积, 然后30 min内梯度过渡到纯有机相，再用纯有机相冲洗20-30倍柱体积；bIU检测VBA
3. 后使用原配的柱堵头拧紧，确保堵头溶剂不会挥发。若是氨基柱则应该在步骤2中添加0.1%的氨水，有利于延长氨基柱的寿命；bIU检测VBA
