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高效液相色谱仪操作技巧 液相色谱如何操作

时间:2025-04-13 21:32:46  来源:  作者:
【客服微信qejc21】任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住,最后的结果是将柱子堵塞,表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。因此,要采取各种预防措施,包



    任何颗粒物进进高效液相色谱仪后都会在柱子进口端被筛板挡住,最后的结果是将柱子堵塞,表现出的特征是系统压力增加并使色谱峰变形。因此,要采取各种预防措施,包括操纵步骤和商品仪器自身的各种过滤设计,努力防止或减少颗粒物进进高效液相色谱仪中,从而延长仪器和色谱柱的使用寿命,并进步数据的可靠性。kyo检测VBA

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    在高效液相色谱仪中,颗粒物的主要来源有三个途径:活动相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。kyo检测VBA

    1、被测样品kyo检测VBA

    使用针筒式过滤器不可能100%得到通过过滤器的被测样品,总会或多或少的丢失。丢失来自这样几方面:过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒连接处的渗漏等。kyo检测VBA

    2、活动相kyo检测VBA

    无论是高效液相色谱仪HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水,最后一步也是通过0.2μm微孔滤膜。任何一种缓冲液中加进了固体物,必然活动相过滤将。少量杂质颗粒存在于活动相中必然成为残渣。kyo检测VBA

    解决办法:kyo检测VBA

    2.1.活动相制备仅采用HPLC级液体时不需要过滤,反之所有活动相组成在使用前必须过滤。kyo检测VBA

    2.2.在连接储液瓶和泵的输液管的末端进口采用下沉式过滤器(常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种)也是很重要的。这个过滤器的规格为≥10μm的微孔物质,所以它不能取代活动相过滤步骤,但是它能除往系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的可靠性。kyo检测VBA

    2.3.推荐在HPLC系统中采用一个0.45或0.5μm的在线多孔过滤器,接在自动进样器和柱子之间,即使已使用了保护柱。这个在线过滤器将成为挡板代替柱头的滤板,而且如采用一个玻璃砂芯滤板,既便宜,更换又方便(几分钟就可更换)。若采用在线过滤,高效液相色谱仪检测每批样品开始前记录下压力值,当压力上升一定值,例如25%或增加500psi,应该更换玻璃砂芯滤板了,更换以后冲洗几分钟系统将恢复到原来的压力值。kyo检测VBA

    3、仪器系统部件的磨损物kyo检测VBA

    最后,在高效液相色谱仪HPLC系统中颗粒物的另一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。kyo检测VBA

    3.1.在一般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为六个月到一年,因此建议半年或一年更换这些密封垫。kyo检测VBA

    3.2.原装密封垫的密封效果可以,更换以后轻易引起活动相渗漏。所以,只要不漏液就不要轻易更换密封垫。kyo检测VBA





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液相色谱柱安装后的使用

  色谱柱在使用前,可以进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。kyo检测VBA

  1、样品的前处理:kyo检测VBA

  a、可以使用流动相溶解样品。kyo检测VBA

  b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。使用0.45?m的过滤膜过滤除去微粒杂质。kyo检测VBA

  2、流动相的配制:kyo检测VBA

  液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:kyo检测VBA

  a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。kyo检测VBA

  b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。kyo检测VBA

  c、流动相的黏度要尽量小,以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降,延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。kyo检测VBA

  d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,可以使用对紫外吸收较低的溶剂配制。kyo检测VBA

  e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。kyo检测VBA

  f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。kyo检测VBA

  3、流动相流速的选择:kyo检测VBA

  因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求较佳柱效,可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。kyo检测VBA

  当选用较佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。kyo检测VBA

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流动相脱气是液相色谱仪提高检测性能和保护色谱柱的有效措施。kyo检测VBA

一、液相色谱仪液相色谱仪流动相脱气的目的:kyo检测VBA

1、使色谱泵输液均匀准确,减小脉动。kyo检测VBA

2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。kyo检测VBA

3、防止气泡引起尖峰。kyo检测VBA

4、使基线稳定,提高信噪比。kyo检测VBA

5、降低溶剂的紫外吸收本底。kyo检测VBA

6、减少死体积。kyo检测VBA

7、防止填料氧化。kyo检测VBA

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二、液相色谱仪流动相常用的脱气方法:kyo检测VBA

1、吹氦脱气法:kyo检测VBA

利用液体中氦气的溶解度比空气低的特性,连续吹氦脱气,效果较好,适合所有溶剂。但成本高,使用较少。kyo检测VBA

2、加热回留法:kyo检测VBA

脱气效果比较好,但操作复杂。kyo检测VBA

3、超声波脱气法:kyo检测VBA

操作简单,但脱气效果不理想。kyo检测VBA

4、抽真空脱气法:kyo检测VBA

利用真空泵降压至0.05~0.07MPa,可除去溶剂中的气体。但抽真空会引起混合溶剂组分的变化,从而影响实验的重现性,多用于单一溶剂体系。kyo检测VBA

5、在线真空脱气法:kyo检测VBA

利用膜渗透技术,在线真空脱气,智能控制,成本低,脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。kyo检测VBA

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