液相色谱法测定硫酸沙丁胺醇气雾剂样品制备：
取本品1瓶，除去盖帽，充分振摇，在通风厨内试喷5次，溶剂洗净套口，充分干燥后，套口对准一10mL量瓶，喷射10次（每次喷射后充分振摇，间隔5秒后喷射第二次），加水溶解并稀释至10mL。
3.仪器：
501液相色谱仪（配UV501紫外检测器），N2000色谱工作站，7725i手动进样阀
色谱条件：
色谱柱：Agela Venusil MP C18，4.6×250mm，5µm ，100Å（订货号：VA952505-0）
Agela Promosil C18，4.6×250mm，5µm ，100Å（订货号：PM952505-0）
流动相：磷酸盐缓冲液（取0.08mol/L磷酸二氢钠溶液，用磷酸调pH=3.1）：甲醇=85：15
波长：220nm
流速：1.0mL/min
柱温：25℃
高效液相色谱仪高压输液系统由贮液器、高压输液泵、过滤器、脱气装置和梯度洗脱装置等组成。Tee检测VBA
一、贮液器：Tee检测VBA
贮液器用来提供足够数量的符合要求的流动相，以完成分析工作。所有溶剂在放入贮液罐前必须经过0.45um滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道和进样阀产生阻塞现象。Tee检测VBA
1、对贮液器的要求：Tee检测VBA
（1）必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液。Tee检测VBA
（2）脱气方便。Tee检测VBA
（3）能耐一定的压力。Tee检测VBA
（4）所选用的材质对所使用的溶剂都是惰性的。Tee检测VBA
2、贮液器材质：Tee检测VBA
一般采用不锈钢、玻璃、聚四氟乙稀、特种塑料聚醚醚酮（PEEK）衬里为材料。Tee检测VBA
3、贮液器容积：Tee检测VBA
一般为0.5～2L为宜。Tee检测VBA
二、高压输液泵：Tee检测VBA
1、类型：Tee检测VBA
有恒流泵和恒压泵。Tee检测VBA
2、发展趋势：Tee检测VBA
（1）高效：填料颗粒小，分离效率高，柱压降大，泵工作压力大。Tee检测VBA
（2）分析时间短：流速更快，柱压降大。Tee检测VBA
（3）减少洗脱液用量。Tee检测VBA
（4）多元洗脱。Tee检测VBA
三、过滤器：Tee检测VBA
在高压输液泵的进口及它的出口与进样阀之间应设置过滤器。高压输液泵的活塞和进样阀阀芯的机械加工精密度非常高，微小的机械杂质进入流动相，会导致上述部件的损坏。同时，机械杂质在柱头上的积累会造成柱压升高，使色谱柱不能正常工作。常见的过滤器有溶剂过滤器和管道过滤器。Tee检测VBA
过滤器的滤芯采用不锈钢烧材料，孔径为2～3um，耐有机溶剂的侵蚀。若发现过滤器堵塞（发生流量减小现象），可将其浸入稀HNO3溶液中，在超声波清洗器中用超声波振荡10～15min，即可将堵塞的固体杂质洗出。若清洗后仍不能达到要求，则应更换滤芯。Tee检测VBA
四、脱气装置：Tee检测VBA
所有溶剂在使用前必须脱气。因为色谱柱是带压力操作的，而检测器是在常压下工作。若流动相中所含的空气不除去，则流动相通过色谱柱时其中的气泡受到压力而压缩，流出色谱柱后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作。这在梯度洗脱时尤其突出。Tee检测VBA
脱气装置有离线超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在线真空脱气等装置。Tee检测VBA
五、梯度洗脱装置：Tee检测VBA
分低压梯度和高压梯度。Tee检测VBA
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高效液相色谱仪色谱柱的正确操作 色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件，被测物质能否被很好的分离和测定，色谱柱的性能起着决定性的作用。因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养，以延长色谱柱的使用寿命。Tee检测VBA
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1、使用预柱和保护柱 预柱(pre-column)安装于泵和进样器之间，它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡，并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。保护柱(guardcolumn)可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱，保护柱应与色谱柱的填料相同。预柱和保护柱可以经常更换，而不需要经常更换色谱柱，这就延长了色谱柱的使用寿命。 2、防止气体进入 有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过脱气的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出；b、如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避免气泡的进入；c、如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排除。可以以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低；d、如果流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。 3、清洗 为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。 凝胶滤过色谱法(GelFiltrationChromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相，用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。如果是连续操作，可以将缓冲溶液置于柱内过夜，但可以是维持小流速(＜0、5ml/min)以防止缓冲盐的析出，如果流动相中含有卤化物，即使是停一夜，也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净，以防止它们对柱体的腐蚀。 4、存放 如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点： a、几天之内的短期放置，应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗)，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。 b、如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱则可用正已烷或庚烷，而凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0、05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。 c、色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。Tee检测VBA
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